2,4—二叔丁基苯酚为内标高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度(2)
2.2.3 2,4-二叔丁基苯酚儲备液 精密称取10.00 mg 2,4-二叔丁基苯酚对照品至10 mL容量瓶中,用稀释液溶解,定容至刻度。2.2.4 2,4-二叔丁基苯酚对照品溶液 精密移取2,4-二叔丁基苯酚储备液1.0 mL至100 mL容量瓶中,用稀释液定容至刻度,摇匀,待用。
2.3 血样处理
取出存放在-80 ℃冰箱中血样,室温解冻后取血样400 μL,加入10 μL 内标2,4-二叔丁基苯酚储备液,590 μL 稀释液,涡旋5 min,2000 g离心15 min,取上层清液进样。
2.4 方法专属性实验
取空白血样400 μL,加入600 μL 稀释液,涡旋5 min,2000 g离心15 min,取上层清液进样,得空白血清色谱图1A,将一定浓度的丙泊酚标准品及内标加入空白血清,按2.3项操作得色谱图1B,受试者注射丙泊酚后,同法操作,得色谱图1C,可见丙泊酚与内标2,4-二叔丁基苯酚的保留时间分别为6.65 min和10.67 min,两者峰形良好,分离完全,理论塔板数按丙泊酚计算不低于14 837 ......
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