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编号:13110038
阿司咪唑对斑马鱼心脏毒性的影响及其分子机制的研究(2)
http://www.100md.com 2017年8月25日 《中国现代医生》 2017年第24期
     1 材料与方法

    1.1 实验动物

    本实验采用的野生AB系斑马鱼,由山东省科学院药物筛选技术重点实验室提供。斑马鱼的饲养和繁殖参照文献[8]。雌雄斑马鱼在28℃,14 h光照/10 h黑暗条件下分开养殖,每日于9:30(am)和4:30(pm)分别喂食两次丰年虫。交配取卵时,于前日将健康成熟斑马鱼按雌雄比1:1或1:2的比例放入交配缸内,中间放置隔板,置于黑暗环境中,次日亮灯前抽去隔板,光照刺激使其排卵。排卵后半小时将成鱼捞出,使排卵时间控制在半小时内,以降低胚胎间发育时间的差异。收集受精卵,并对其进行消毒和清洗。随后将受精卵置于28℃培养箱内,保持14 h光照/10 h黑暗周期培养,并及时吸出死亡胚胎。

    1.2 试剂与仪器

    阿司咪唑标准品购自中国药检所,编号为100301。上述标准品使用二甲基亚砜(DMSO,国药)溶解后,分别配置成4、10和20 μmol/L 的工作液。三卡因(Tricaine)货号A5040和苯硫脲(PTU)货号P7629均购自美国Sigma公司。RNase-free水(RNase-free water)货号9012、RNA提取试剂盒(RNAiso Plus)货号9108、反转录试剂盒(PrimeScriptTM RT Master Mix)货号RR036A、 RT-qPCR试剂盒(SYBR Premix Dimer EeaserTM)货号RR091 ......
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