1.2 方法

    1.2.1 实时定量PCR方法 PCR引物序列(FHL1基因)见表1。提取新鲜的甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿标本各40例，每例样本重约0.2 g，采用Trizol法提取组织中总的RNA，并且测定RNA提取的浓度及纯度，证明提取的RNA完整。cDNA合成(20 μL反应体系)：反应采用20μL反应体系，依据说明书依次加入试剂，在37℃水浴中放置60 min。参照试剂盒说明完成Real-time PCR。

    1.2.2 Western-blotting方法 取出新鲜的甲状腺乳头状癌和对照组标本，每组均40例，每例约0.2 g，按照说明书提取组织蛋白，然后测定总蛋白浓度，配置电泳所需的浓缩胶和分离胶，每个小孔的用量是50 μg，基准Marker为5 μL，100 V电泳，继续15 V电压，经过1 h后将胶移至硝基纤维膜上，然后脱脂奶粉脱脂2 h，滴加Ⅰ抗(FHL1抗体浓度1∶1000)，置于4℃冰箱过夜，滴加Ⅱ抗(浓度为1∶5000)室温静置1.5 h，滴加发光液。

    1.3 观察指标

    实时定量PCR观察指标：收集溶解、扩增曲线 ......