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编号:13248650
结直肠癌中miR—106b增强肿瘤细胞放疗抵抗作用机制的初步分析(2)
http://www.100md.com 2018年1月5日 《中国现代医生》 2018年第1期
     1.2.3 细胞辐射处理及检测 使用5%的胰酶消化细胞制作得到单细胞悬液,分析细胞的浓度,接种到6孔板,在培养箱当中持续孵育9 h之后,应用Varian 2300加速器进行6MV-X线照射,其中剂量率是2 Gy/min,细胞覆盖1 cm玻璃,完成剂量建成之后终止培养,并且吸去培养液。每孔当中添加150 μL的DMSO持续振荡5 min之后检测OD490 nm位置的具体数值[6]。

    1.2.4 细胞辐射之后检测对克隆的影响 两组细胞接种到6孔板中,每组分成0 Gy、l Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy等不同的剂量,每个剂量组设置3个不同的复孔[7]。照射之后的细胞置于常温条件下持续培养2周,期间根据pH值情况更换培养液。培养板孔当中发现肉眼能够发现的克隆之后停止培养,去除培养液之后PBS清洗细胞反复冲洗[8]。应用甲醇持续固定,之后去除甲醛,应用1%的结晶紫乙醇溶液进行染色,洗去染液之后干燥,并应用显微镜统计50个以上的克隆,从而计算克隆率(克隆数/细胞数×100%)及存活分数(受照射细胞克隆率/对照细胞克隆率×100%)。将3次照射得到的存活分数平均值当作结果[9] ......
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