应 樱

    浙江省嘉兴市第一医院呼吸科，浙江嘉兴 314000

    目前，抗生素耐药已经成为一个重大的公共卫生问题，临床治疗感染性疾病的新方向变为将内源性天然抗生素抗菌肽LL-37表达增加，促进宿主免疫防御功能的提升[1-3]。为了将有效的理论依据提供给临床对抗生素的科学合理应用，对感染性疾病进行积极有效的治疗，从而对患者预后进行切实有效的改善，本文研究SIRT1对肺炎链球菌感染肺上皮细胞诱导LL-37表达的调控机制进行了研究，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料来源

    实验设计时间为2016年11月～2017年10月，采用中国科学院上海细胞生物研究所细胞库提供的人肺腺癌细胞系A549(A549细胞)、人支气管上皮细胞(BEAS-2B细胞)，美国模式肺炎链球菌(SP)作为细胞菌株，培养物集存库 (ATCC)为6303。美国GIBCO公司生产的RPMI1640培养基、杭州四季青生物工程材料有限公司生产的胎牛血清、美国OXOID公司生产的哥伦比亚血琼脂基础等，美国Forma公司生产的二级生物安全柜，美国Thermo公司生产的超净工作台、CO2培养箱等。

    1.2 方法

    对细胞进行重悬，在此过程中将不含双抗RPMI1640培养液充分利用起来，以(3～4)×105/mL密度在6孔板中接种A549细胞，待细胞向30%～50%满皿底面积生长时分为对照组、si-SIRT1序列①组、si-SIRT1序列②组、阴性对照 siRNA(siRNA-NC)组、lipo组五组。其中对照组不将其他试剂加入培养基；si-SIRT1序列①组将转染si-SIRT1序列①加入培养基；si-SIRT1序列②组将转染si-SIRT1序列②加入培养基；阴性对照siRNA(siRNA-NC)组将转染不匹配人的任何基因的siRNA(转染无意义siRNA)加入培养基，将其作为对照，以将本实验受到siRNA及转染操作的影响排除；lipo组将lipofectaminTM2000试剂加入培养基，以将本实验受到脂质体的影响排除。上海吉马公司设计合成SIRT1 siRNA序列，具体见表1。由于细胞转染siRNA中涉及RNA，因此去酶处理实验中应用EP管及枪头等实验器材，从而有效避免Rnase降解的现象。采用qRT-PCR对A549细胞的SIRT1沉默效果进行检测，并采用Western Blot对A549细胞的SIRT1沉默效果进行检测[4-10]。 ......