T—SPOT.TB测定、PPD试验和结核蛋白芯片对儿童肺结核诊断价值的研究(2)
1.2 检测方法
1.2.1 T-SPOT.TB检测 采集受试患儿外周静脉血5 mL用肝素钠抗凝,使用试剂盒从外周血分离出单个核细胞,参照试剂盒使用说明书进行检测,并置于标准培养箱中孵育16~20 h,显色洗板后对斑点进行计数,设立阴阳性对照孔,结果判定标准[4-5]:阴性对照孔斑点数为 0~5 个,CFP-10 和ESAT-6抗原检测孔任一孔计数-阴性孔计数≥6判为阳性;如果阴性对照孔斑点数≥6,检测孔斑点数≥2倍阴性孔斑点数判为阳性。
1.2.2 结核抗体蛋白检测芯片的检测 应用蛋白芯片法检测所有血清标本,试剂盒、蛋白芯片阅读仪等检测仪器均由南京大渊生物技术工程有限公司提供,同一名检验人员按照说明书和相关规定在无菌条件下进行所有操作,完成后将芯片放入芯片识别仪,根据生物芯片检测软件按程序操作,不同抗原点阵的灰度值进行分析。该抗体检测蛋白芯片试剂盒采用基因工程表达的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、结核菌重组蛋白抗原16 kD和38 kD蛋白检测待检血清中的抗体,若其中任何一种抗体阳性,则判断该病例结核分枝杆菌抗体阳性。若三种抗体检测均为阴性,则结果可判定为阴性[6]。
1.2.3 结核菌素纯蛋白衍化物测定 于患儿前臂掌侧皮内注射 TB.PPD 0.1 mol·L-1(5 U) ......
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