1.2 细胞培养

    人肾癌细胞株786-O接种于RMPI 1640培养基，培养基中含10%胎牛血清，100 mg/L链霉素及1.0×104 IU/L青霉素，培养于37℃、5% CO2饱和湿度的孵箱中。

    1.3 DNCREB质粒转染

    在前期实验中，我们构建了Ser-133位点突变的DNCREB重组质粒[7]。因此，本实验将细胞分组为：①空白对照组(Control组)；②pCI neo空质粒组(Vector组)；③DNCREB组。转染过程如下：将6孔板置于超声探头上方，探头上涂少量耦合剂，紧贴6孔板下方。我们预实验研究表明：当质粒质量为30 μg、造影剂浓度为10%(v/v)、MI指数为0.6、辐照时间5 min时，质粒转染率最高。待转染完成后，37℃培养箱继续培养6 h后更换新鲜培养基，继续培养24 h。

    1.4 Western blot实验

    取对数生长期786-O细胞，以2.0×104个/孔密度接种于6孔板。待超声微泡介导转染后，更换完全培养基，待细胞生长48 h ......