1 材料与方法

    1.1主要材料与试剂

    人膀胱癌细胞株 T24、T24T由本实验室保存。DMEM/Ham's F-12(1：1 volume)培养基购于美国GIBCO公司，细胞总RNA提取試剂盒购自美国QIAGEN公司，荧光定量PCR试剂盒购自美国QIAGEN公司，转染试剂盒PolyJetTM DNA In Vitro Transfection Reagent购自美国Sigma 公司，LV3-pGLV -h1-GFP-puro-Mir-149-5p-pre以及对照质粒均购自上海吉玛制药技术有限公司，β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PDGFRA、IGFBP5抗体均购自Abcam公司。

    1.2 细胞株的培养、转染和分组

    实验用所有细胞株均使用含5%胎牛血清的DMEM/Ham's F-12(1：1 volume)培养基，并置于37℃ 5% 的CO2培养箱中培养。

    1.3 构建miRNA-149稳定过表达膀胱癌细胞

    转染前1天将T24、T24T细胞种于6孔板中，待细胞生长至70%左右进行转染。转染前 1 h，弃掉培养基，用PBS洗一次，加入1 mL不含血清，不含抗生素DMEM 培养基 ......