1.2方法

    1.2.1 建立档案 记录患者的年龄、性别、联系方式、家庭情况等，同时记录患者的疾病类型、疾病病程、既往发病等相关情况。患者每次就诊后要将其病情如实记录，保留患者完整的病例记录。患者均知情同意本研究，同时经过我院伦理委员会批准，将132例分为K-ras基因突变组62例及K-ras基因未突变组70例，同时将132例分为p53基因突变组80例及p53基因未突变组52例。

    1.2.2 提取结直肠癌基因组的DNA 取出组织研磨，消化，超速离心，DNA沉于试管底部，弃上清液，加入800 mL氯仿进行抽提，最后放置于无水乙醇(提前预冷)中，静置等沉淀析出，将TE溶解，留存便于进行后续的实验。PCR反应程序：总体系达20 μL，于94℃变性(75 s)，54℃退火(60 s)，72℃延伸(60 s)，循环30次。电泳及银染：取出5 μL PCR产物，加入5 μL缓冲液混合，在98℃变性处理300 s，冷浴150 s，加入聚丙烯酰胺(8%)，进行电泳并进行银染鉴定[5]。

    1.2.3 分子生物学水平实验-免疫组化 (1)标本：EDTA抗凝全血20 mL；(2)DNA抽提：运用Peacl-Treeze说明书中的方法；(3)测序：PCR扩增：扩增1号外显子-8号外显子 ......