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编号:13319450
载芦荟大黄素新型纳米微球体外抗胰腺癌细胞的实验研究(2)
http://www.100md.com 2019年3月5日 《中国现代医生》 2019年第7期
     1.2 实验细胞

    所需细胞系为购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库的人胰腺癌细胞系SWl990,培养于RPMI-1640完全培养液中,置于相对湿度为95%、恒温37℃、含5%CO2的环境中单层生长,取对数生长期细胞用于实验。

    1.3 实验方法

    ①MTT实验 分组:A组:抗EGFR芦荟大黄素包埋的壳聚糖纳米微球(AbC-GC-DDP)组;B组:芦荟大黄素包埋的壳聚糖纳米微球(GC-DDP)组;C组:芦荟大黄素组(aloe-emodin,AE);D组:空白壳聚糖纳米微球(GC)组;E组:无药对照组(只加RPMI-1640培养液);A、B、C组芦荟大黄素浓度一致为60 μmol/L[3,4],以RPMI-1640培养液配置。取对数生长期的SW1990细胞消化、计数,以5×103/孔的密度接种到96孔培养孔中,继续培养24 h,细胞贴壁后给药。给药后继续培养24 h、48 h、72 h,每孔加入20 μL的MTT(5 mg/mL)溶液,继续在培养箱内进行孵育6 h,培养完成后去除孔内培养液,每孔加入二甲基亚砜,轻轻震荡,溶解后用酶标仪测OD值。细胞抑制率(IR)=(1-给药组OD值/无药组OD值)×100%。②细胞周期测定 采用流式细胞术分析[5],即分别收集经A、B、C、D、E组处理24 h后的SW1990细胞,先用胎牛血清洗涤2次,再加入70%乙醇(-20℃预冷的),在4℃恒温固定过夜;去除乙醇液,再次用胎牛血清洗涤1次,加入RNase 50 μg/mL,在37℃恒温水浴30 min;加染色剂碘化乙啶(PI) ......
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