豆茶决明冲剂对高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6J小鼠的相关炎症因子及炎症通路的影响(3)
1.3观察指标(1)一般情况观察:每天观察小鼠毛色、状态、饮食及尿液粪便。(2)体重、空腹血糖及脂肪重量。给药后,每周称体重,第8周末,禁食不禁水12 h,测量空腹血糖,摘眼球取血。处死小鼠,取小鼠腹部、附睾以及双肾部位的脂肪,用滤纸吸取表面液体,用电子天平分别称重,-80℃冷藏备用。(3)血清FBG、INS和血脂HDL-C、LDL-C、TC、TG的浓度:按照试剂盒说明检测。(4)血中瘦素、脂联素、TNF-α、IL-6、MCP-1的含量:酶联免疫法试剂盒检测。(5)计算胰岛素抵抗指数:IRI=(空腹胰岛素浓度×空腹血糖浓度)/22.5。(6)脂肪组织中p-IKKβ/IKKβ、p-JNK/JNK、NFκB的變化:蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测,取腹部脂肪组织100 mg放入液氮研磨,加500 μL裂解液与磷酸酶抑制剂混合液(100:1)充分裂解,4℃、12000转/min、离心10 min,重复离心直到上清液清澈,提取上清。BCA试剂盒检测样品蛋白浓度。蛋白质样品加上样缓冲液95℃变性5 min,用10% SDS-PAGE凝胶,90 V分离蛋白,400 mA转膜40 min ......
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