1.2 方法与试剂

    DAB浓缩型试剂盒、苏木素、中性树胶均购自bioswamp公司，Lgr5多克隆兔抗体(工作浓度1：25)、TFF2多克隆兔抗体(工作浓度1：40)均购自Abcam公司。Lgr5阳性信号定位在细胞质和细胞核，TFF2阳性信号定位在细胞质和(或)细胞核。

    1.3主要仪器

    OLYMPUS正置显微镜、移液器、恒温烘箱、石蜡切片机、摊片机、IMS图像分析系统。

    1.4免疫组织化学染色

    采用免疫组化SP法，抗原修复采用高压热修复。每组染色均以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知的阳性组织作为阳性对照。具体实验步骤如下：4 μm厚的石蜡切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化、0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液高压修复、3% H2O2室温孵育阻断内源性过氧化物酶，PBS缓冲液冲洗。滴加一抗，4℃冰箱过夜，滴加二抗室温孵育，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片，光镜下观察结果。

    1.5结果判定

    由2位病理科医师在未知临床病理资料下读取结果，并协商取得统一。判定方法参考黄江龙等[2]、江晓红等[3]等采用的方法 ......