Cx46低表达与晶状体上皮细胞凋亡和年龄相关性白内障的关联分析(2)
1.4 细胞活性和MTT分析利用MTT法分析测定细胞活性。细胞转染和特殊处理后,在5 mg/mL MTT溶液中孵育4 h。移弃上清液,再溶于二甲亚砜溶液中。细胞活性可利用酶标仪测定其492 nm波长处光吸收值。
1.5 凋亡检测
细胞凋亡的检测通过使用33342染料(Sigma公司)观察细胞核形态的改变。细胞平铺于6孔板上培养,经33342染料固定后在显微镜下进行分析。随机选取5个镜下视野统计凋亡的细胞核数量。
1.6 Western blotting实验
经转染以及过氧化氢处理后,SRA01/04细胞裂解提蛋白。将总蛋白直接上样到12% SDS-PAGE胶加样孔内,电泳,PVDF膜转膜,经特异性抗Cx46抗体(抗β-actin抗体作为内参)及二抗孵育后,利用皮尔斯公司的SuperSignal West Pico试剂盒的化学发光底物法,对信号进行可视化。
1.7 统计学分析
采用SPSS 16.0统计学软件分析数据。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验分析 ......
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