1.4 NK细胞的制备

    1.4.1 实验材料 淋巴细胞分离液：比重1.077。ksNK试剂盒：试剂A液、工程细胞A、工程细胞B。 ksNK专用培养基(PNS-0300)。T25培养瓶，T75培养瓶，超净工作台，离心机，倒置显微镜，血细胞计数仪，CO2培养箱，抗CD16-PE抗体，抗CD56-PE抗体，抗CD3-FITC抗体，生理盐水。

    1.4.2 NK细胞的分离、扩增和活化 准备工作：打开超净工作台的紫外灯，照射30 min。细胞分离及培养：肝素抗凝的60 mL外周血作为生产标本准备。通过淋巴细胞分离液分离出单个核细胞(PBMC)，预计获得(4～9)×107个细胞即可。对单个核细胞进行洗涤、重悬，计数后每(3.5～4.5)×107个细胞用20 mL NK专用培养基(含IL-2因子100 U/mL)重悬并加入1支工程细胞A，添加1 mL自体血清，转移至1个75 cm2培养瓶，当每份细胞体积达到80～120 mL时，加入1支工程细胞B并等体积补液，于37°C、5% CO2培养箱中培养(每人份宜接1～2个75 cm2培养瓶) ......