1.5 Transwell实验

    取Transwell小室放入24孔板内，用Matrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，室温下风干;各组细胞常规消化后，用PBS漂洗2次后DMEM培养基重悬，细胞密度调整至1×105个/mL，取细胞悬液200 μL加入已铺Matrigel胶的Transwell小室的上室，将600 μL含20%胎牛血清的DMEM培养基加入下室;常规培养24 h后，取出Transwell小室，用棉签擦去上室内面的细胞，4%多聚甲醛固定15 min，0.5%结晶紫溶液(用甲醇配制)染色15 min，PBS洗3遍，用倒置显微镜随机选取5个视野(200×)进行拍照。拍照后用33%冰醋酸300 μL溶解膜上的结晶紫，酶标仪测定D573。穿膜细胞计数。每组设置3个复孔，重复3次，取平均值。

    1.6 统计学分析

    应用SPSS 21.0软件进行实验数据的分析。所有数据均进行正态性分布和方差齐性检验，符合正态性分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示。组间两两比较采用t检验，偏态分布数据采用非参数检验Wilcoxon符号秩检验。多组间比较采用单因素方差分析。计数资料采用[n(%)] ......