1.3 免疫组化

    石蜡包埋切片用于染色，切片为4 μm层厚连续切割。在去石蜡化和再水化后，在氯化钠缓冲液(pH6.0)中加热20 min。通过在3%过氧化氢中培养10 min来阻断过氧化物酶。用小鼠单克隆抗Ki-67(稀释液1：500，Abcam公司，AB6526)在4℃培养过夜。在用PBS洗涤后，将载玻片与Dako Realtm enVision TM/HRP兔/小鼠(env)试剂(k-5007，Dako，Glostrup，丹麦)一起培养。使用DAB显色剂进行1-3 min的染色。用苏木精复染切片，脱水，然后用中性树胶封片。阴性对照组用磷酸盐缓冲液(PBS)代替主要抗体。

    切片由2位病理科医生用双盲法进行阅片。对于Ki-67染色，他们从5个随机选择的代表性区域(×400)计数细胞。根据阳性细胞的比例对染色进行半定量评价，评价标准：阴性(-)<5%，弱阳性(+)：5%～10%，中阳性(++)10%～30%，强阳性(+++)>30%[6]。

    1.4 统计学方法

    采用SPSS统计软件(Windows版 ......