miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响及其机制的初步研究(2)
1 材料与方法1.1 一般材料
HUVECs购于北京大学医学院肿瘤研究所。miR-29c mimics、miR-29c mimics阴性对照、miR-29c inhibitor阴性对照、miR-29c inhibitor来源于上海吉玛公司;转染试剂和无血清培养基来源于Invitrogen公司;MTT试剂来源于AMRESCO公司;TNF-α来源于Sigma公司;BCA试剂盒、ECL试剂盒和Heochest 33342染色液均来源于碧云天研究所;总一氧化氮检测试剂盒来源于碧云天公司;p-Akt、eNOS、p-eNOS抗体来源于Cell Signaling公司;β-actin来源于Bioworld公司、二抗来源于康为世纪公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及处理 取HUVECs培养于适宜温湿度条件下,选择生长至80%融合的细胞进行各指标检测。采用接种于96孔板的细胞组,使用MTT法筛选miR-29c mimics转染HUVECs的最佳浓度和时间,并使用同法检测miR-29c对HUVECs增殖活力的影响;采用接种于6孔板的细胞组 ......
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