成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响(2)
1.2 方法1.2.1 细胞培养 人卵巢癌OVCAR3细胞株由中国医科大学馈赠。细胞培养:将OVCAR3细胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,于37℃、5%CO2恒温箱中培养,每48小时换液1次,当细胞长满瓶壁的80%~90%时,用0.25%胰酶消化,按1∶3比例进行传代培养。
1.2.2 MTT比色法测增殖实验 将OVCAR3细胞(3.0×104/mL)接种于96孔板中,用含5% FBS的培养基培养24 h。每个96孔板均分为6组,每组设4个复孔;24 h后,每板上的6组分别加入无血清培养基(N)、FAP蛋白(1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL,各浓度4个复孔)处理;于0、24、48 h各取出一块96孔板,加入新鲜配制的MTT溶液继续培养4 h。离心吸弃上清液,每孔加入二甲基亚砜,振荡10 min,充分溶解结晶。以空白孔调零,酶标测定仪检测490 nm波长下的光吸收值(OD值)。
1.2.3流式細胞仪测细胞周期 将OVCAR3细胞(1.0×104/mL)接种于6孔板 ......
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