包被：酶标板上加入100 μL/孔浓度为5×108 cfu/mL的P.g菌液或4 μg/mL rHA2，贴上封板膜，4℃过夜;封闭：倒掉孔内液体，300 μL/孔PBST洗涤，甩干，在不脱纤维的纸上拍干，重复3次，300 μL/孔5%的脱脂奶粉37℃封闭1 h;加样：洗涤3次，分别加入2倍比稀释的单抗100 μL/孔，单抗均稀释成0.5 mg/mL后，用样稀(5%脱脂奶粉：PBST=1∶15配制)二倍比从1∶1 000到1∶128 000稀释，以不相关单抗D1作阴性对照，每个浓度设置3个复孔，37℃孵育30 min;加二抗：洗涤3次，加入1∶5000稀释的HRP标记的山羊抗小鼠IgG 100 μL/孔，37℃孵育30 min;显色：洗涤4次，加入TMB显色液100 μL/孔，室温避光30 min;终止：加入50 μL/孔的终止液;读数：立即用酶标仪读取A450 nm结果。结果判定：按三复孔的平均值计算，mAb的A450 nm值为(P)，D1的A450 nm为阴性对照(N)，P/N>2为阳性，表明当前稀释倍数时mAb识别P.g或rHA2。

    1.11 单克隆抗体特异性检测

    包被5×107 cfu/mL的P.g、P.i、F.n、A.a、A.v和S.m;mAb均1∶1000稀释;其余操作步骤同效价测定 ......