应盼 吴先龙 杨志辉 辛文伟

    [摘要] 目的 探討乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。 方法 将60只SD大鼠经股动脉放血制作休克模型，采用随机数字表法分为A、B、C三组，每组20只，其中A组不予复苏，B组休克后60 min给予醋酸钠林格液复苏，C组采用醋酸钠林格液联合乌司他丁复苏。采集大鼠复苏后肺组织，对肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6以及IL-10的mRNA水平予以检测，采用Western blotting对肺组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量予以检测，对三组大鼠肺组织病理学变化予以观察。 结果 与A组、B组相比，C组大鼠miR-146a、IL-4、IL-10 mRNA水平提高，TNF-α、IL-1、IL-6水平下降，差异有统计学意义(P0.05)。①休克模型构建：首先对大鼠进行称重，然后给予戊巴比妥钠50.25 mL/100 g(上海新亚药业有限公司，国药准字H31020240)、异氟醚1.0 mL/kg(河北一品制药股份有限公司，国药准字H19980141)腹腔注射进行麻醉，完成麻醉后，在手术台上将大鼠摆为仰卧位并予以固定，常规备皮、消毒、铺巾，将大鼠两侧腹股沟位置皮肤切开，对股动脉、股静脉进行钝性游离，置管并妥善固定，在其中注入枸橼酸钠注射液，确保管腔无堵塞，选择置于右侧股动脉的导管与生物信号采集系统连接，监测大鼠MAP。选择右侧股静脉完成液体复苏相关操作，左侧股动脉则建立休克模型，并将其连接微量泵。控制适宜的手术室温度，以25℃为宜。②复苏模型构建：完成置管后，静置20 min，采用2 mL注射器按照2 mL/min的速率从股动脉缓慢放血，直至血压维持在30～40 mmHg。回血采用缓慢、间断的方式，维持MAP在30～40 mmHg。60 min后A组不实施液体复苏，于左侧股静脉推注2 mL生理盐水，5 min内完成;B组休克后60 min右侧股静脉给予醋酸钠林格液输入;C组采用醋酸钠林格液联合乌司他丁复苏，选择左侧股静脉给予100 000 U/kg乌司他丁静脉推注，醋酸钠林格液500 mL/次。复苏后提取大鼠肺组织。实验期间采用微量泵经左侧股静脉泵入5 mL生理盐水。

    1.4 肺组织炎症指标检测

    提取肺组织标本后，按照要求完成总RNA分离及提取操作，所用方法为Trizol法，使其成为cDNA，实施qPCR扩增处理。扩增引物选择的是GAPDH，条件设置参照以往条件。预变性处理设置为95℃ 1 min;变性处理条件设置为95℃ 15 s ......