王放 薛今俊

    [摘要] 目的 探討儿童功能性便秘不同严重程度肠道菌群特点及胃肠激素水平变化。方法? 回顾性分析2019年1月至2020年10月浙江省立同德医院诊治的120例功能性便秘患儿的临床资料，将其设置为观察组，依据严重程度分为重度组(43例)与轻中度组(77例)。另选择同期进行体检的健康儿童120名为对照组。所有患者均检测肠道菌群数量及胃肠激素P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)、促胃动素(MTL)水平。结果? ①观察组患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显少于对照组，大肠埃希菌明显多于对照组，差异均有统计学意义(P0.05)，具有可比性。

    1.2 肠道菌群与胃肠激素水平检测方法

    1.2.1 肠道菌群检测? 无菌收集新鲜粪便200 mg置入无菌离心管内，保存于-70℃环境中;选择试剂盒Pow-erfecal DNA Isolation Ki对粪便内的DNA进行提取，按照双歧杆菌、大肠埃希菌、乳杆菌的基因序列16S rDNA对PCR引物进行设计，实施荧光定量PCR反应，反应的体系合计20 μl，其中1 μl下游引物、1 μl上游引物、9 μl SYBRGreen、7 μl DNA模板、2 μl ddH2O;反应条件为预变性95℃ 30 s、变性95℃ 5 s、退火34 s、延伸72℃ 30 s，最后延伸10 min，共计40个循环;纯化回收扩增的产物 ......