梁晓艳 赵 梦 陈 超 周 洋 李斌斌 赵紫琦 顾 玉

    1.承德护理职业学院基础部，河北承德 067000；2.河北省承德市中心医院检验科，河北承德 067000

    缺血性脑血管疾病(ischemic cerebrovascular disease，ICVD)具有高复发率、高致残率和高死亡率等特点，挽救脑缺血后濒死神经元，改善缺血所致的神经功能障碍为医学界的一大难题。近年来，随着对成年神经系统再生能力和干细胞的研究逐步深入，运用神经干细胞(neural stem cell，NSC)治疗ICVD 成为临床研究热点。研究证实，成年哺乳动物(包括成人)脑内的NSC 绝大多数处于相对静止的状态，当脑缺血或其他脑损伤时，可诱导其增生、定向迁移并分化为神经元和神经胶质细胞。然而，脑缺血后NSC何时开始增生、增生高峰期、持续时间及分化结局等仍有待进一步研究。巢蛋白(neuro epithelial stem cell prote，Nestin)是NSC 最常用的标志物，可在一定程度上反映NSC 的变化，其短暂表达于胚胎发育早期的NSC，脑缺血损伤后成年脑组织又能重新大量表达。为了能更有效地运用内源性NSC 来促进脑缺血后神经功能的修复，研究脑缺血后NSC 的具体反应至关重要。因此，本研究通过采用免疫组织化学技术，观察脑缺血大鼠脑内Nestin 的表达变化，旨在探讨脑缺血后NSC 的增生、迁移和分化规律，为临床上运用内源性NSC 来治疗ICVD 患者提供一定实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物与分组 成年健康SD 雄性大鼠77 只(成都达硕生物科技有限公司)，实验动物合格证号：SCXK(川)2008-24，体质量(260±20)g，其中2只大鼠用于脑缺血后2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色(2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC)，余75 只采用随机数字法随机分为正常对照组(Control)、假手术组(Sham)和缺血组(大脑中动脉闭塞middle cerebral artery occlusion，MCAO)；假手术组和缺血组又分为术后1d、2d、3d、1 周、2 周、3 周和4 周共7个亚组，每组5 只。本研究通过昆明医科大学动物伦理委员会审(审批号：D·WLL20220007001)，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。

    1.1.2 主要试剂和仪器 TTC 染色、兔抗GFAP 抗体、Cy3 标记的羊抗鼠IgG、FITC 标记的羊抗兔IgG(美国Sigma Chemical 公司)；鼠抗Nestin 抗体(美国Santa cruz 公司)；S-P 即用型超敏试剂盒、DAB 显色试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)；激光共聚焦显微镜(日本奥林巴斯公司) ......