骆益华 吴丽娜 吴 俊 赵 明 邵飞琴 张伟群

    1.杭州市临安区第一人民医院检验科，浙江杭州 311300；2.杭州市临安区疾病预防控制中心，浙江杭州 311300

    艰难梭菌实验室检测方法主要有细胞毒素中和试验(cell cytotoxicity assay，CCTA)、厌氧培养法、免疫学毒素检测包括酶联免疫分析(enzyme immunoassay，EIA)法、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测方法等，但是各种方法均存在一定的缺点和局限性。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术是一种核酸扩增方法，该方法使用4 对引物检测位于tcdA5 端的6个不同保守区域，在等温条件下进行扩增，具有快速、费用低、敏感度高、特异性强、操作简便的特点。

    本研究旨在研究利用环介导等温扩增(loopmediated isothermal amplification，LAMP)结合核酸试纸条技术建立一种艰难梭菌快速检测的方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    采集2016 年1 月至2017 年12 月杭州市临安区第一人民医院临床感染性腹泻患者的粪便标本201份，所有粪便标本均于-80℃冷冻保存。沙门菌、副溶血性弧菌、志贺菌、致病性大肠埃希菌、创伤弧菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌共7 个菌株，均为标准菌株。

    1.2 仪器与试剂

    台式高速离心机(德国Eppendorf公司)；CFX-96 Touch 型实时荧光定量PCR 仪；生物安全柜(NU-543-600S)；超微量紫外分光光度计(Thermo NDONE-W)；高热灭菌器(日本松下公司)；恒温培养箱(日本松下公司)；冰箱(日本三洋公司)。LAMP脱氧核糖酸扩增试剂盒(日本荣研株式会社)；荧光目视检测试剂盒(日本荣研株式会社)；DNA Kit 提取试剂盒；溶菌酶 ......