王保全 陈江涛 申智慧 周黎明 李文倩 史朝辉 翟巧玲 张永州

    1.河南大学淮河医院药学部，河南开封 475004；2.河南大学淮河医院普外科，河南开封 475004；3.河南省肿瘤医院血液科，河南郑州 450009；4.河南大学郑州颐和医院药学部，河南郑州 450047

    RNA 干扰(RNA interference，RNAi)是指细胞在发展进程中高度保守的、由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)诱发的、同源信使RNA(messenger RNA，mRNA)高效特异性降解的现象。其作为基因治疗的一种新模式，始终是当前肿瘤防治研究的热点话题，在治疗上，RNAi 通过递送小RNA 双链结合体，包括内源性微RNA、外源性干扰小RNA(small interfering RNA，siRNA)，短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)等实现基因干预效应。但siRNA 进入人体后易被人类血清中的核糖核酸酶家族降解，且由于siRNA 自身电荷特异性难以进入正常细胞内，所以对siRNA 递送体系的研究是将siRNA 应用于临床治疗的一大挑战。基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体。病毒载体质粒转染效率高，但对人体毒性过大影响其临床应用；非病毒载体可填补病毒载体的部分不足，近年来备受重视。如脂质体介导的基因组转化与病毒载体比较，优势凸显。阳离子脂质体携带的正电荷可中和siRNA 带有的负电荷，形成具有紧密结构的复合物，极大地延长循环时间，促进siRNA 递送。本研究以K562 细胞为研究对象，选择阳离子磷脂、硫酸鱼精蛋白、小牛胸腺DNA，制备新型阳离子脂质体-siRNA 复合体，观察其对K562 细胞生长的影响，并探讨其可能的分子机制。

    1 材料和方法

    1.1 试剂与仪器

    1,2 二油酰基-3-三甲基氨基丙烷(美国Sigma公司)，胆固醇、小牛胸腺DNA、琼脂糖(上海生物工程有限公司)，DNA-Marker(上海生物工程有限公司)，吖啶橙(美国Sigma 公司)，反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)试剂盒(大连宝生物公司)，胎牛血清(美国Introgen 公司)，RPMI-1640 培养基(美国Hyclone 公司)，二甲亚砜(DMSO，上海生物工程有限公司)，MTT 细胞增殖与毒性检测试剂盒(杭州碧云天公司) ......