励 超 钱 飚 鲁洪丰 李旭军

    中国科学院大学宁波华美医院乳腺外科，浙江宁波 315000

    三阴性乳腺癌(triple–negative breast cancer，TNBC)是女性最常见的恶性肿瘤之一，作为复杂的疾病类型，其表现出明显的肿瘤间和肿瘤内异质性[1,2]。研究表明，晚期乳腺癌通常可转移到骨、肝、肺和脑等远处器官[3]，优化当前乳腺癌的临床治疗方法以寻找新型诊疗方案仍是目前的研究热点。Polo样蛋白激酶1(Polo–like kinase1，PLK1)是PLK 家族成员之一，是一类广泛存在于真核细胞中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。现已知PLK1 在大多数肿瘤中高度表达，如骨肉瘤、非小细胞肺癌和乳腺癌等，并与患者的肿瘤细胞增殖和预后密切相关[4-6]。此外，通过抑制PLK1 免受蛋白酶体降解能够促进乳腺癌细胞增殖，提示PLK1 可能是治疗乳腺癌的潜在靶点[7]。目前，随着对肿瘤发生发展机制和现代生物技术的深入探索，自体免疫细胞疗法对肿瘤治疗发挥重要作用，其中，细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine–induced killer cell，CIK 细胞)是用于免疫治疗的常见免疫效应细胞，可介导肿瘤细胞凋亡或导致细胞死亡，并分泌相关细胞因子以促进抗肿瘤作用，具有杀瘤活性高和识别能力强等优点[8]。鉴于此，本研究旨在探究抑制PLK1 表达联合CIK 细胞作用下对乳腺癌细胞的影响，以期为该疾病的治疗提供新选择。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 SPF 级BALB/c 裸鼠40 只，雌性，4～6 周龄，体质量18～20g，饲养室温度22～24℃、相对湿度(50±5)%且每日光照/黑暗交替12h，饲养环境经严格灭菌处理，期间自由饮水与摄食，适应性饲喂1 周后开始实验。本研究获得医院动物伦理委员会审批通过(批件号：SL–NBEY–KY–2022–045–03)。

    1.1.2 细胞 TNBC细胞株MDA–MB–231购于美国典型培养物保藏中心。

    1.1.3 主要试剂 PLK1 抑制剂BI–2536 购于美国Selleck 公司，γ 干扰素(interferon–γ，IFN–γ)购于美国PeproTech 公司，白细胞介素–2(interleukin 2，IL–2)购于北京四环生物制药有限公司，CD3McAb购于美国Corning 公司，MTT 试剂盒和苏木精–伊红染色(hematoxylin and eosin staining，HE 染色)试剂盒购于北京索莱宝生物科技有限公司 ......