郭利华 胡桂梅 丁 勇 王静静 叶国良

    宁波大学医学院附属医院消化内科，浙江宁波 315020

    miR–100 位于人染色体11q24.1，主要参与基因转录后调控，参与肿瘤细胞的增殖、凋亡等细胞信号途径，与正常组织比较，miR–100 在肿瘤组织中表达异常[1-3]。课题组前期研究发现，胃上皮细胞感染幽门螺杆菌后miR–100 表达异常，与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)相关信号通路相关[4]，进一步对胃癌细胞系进行miR–100 检测，发现胃癌细胞miR–100 较胃黏膜上皮细胞表达下降，考虑miR–100 可能参与胃癌发展进程。miR–100 作为miR–99 家族中的重要成员，研究已证实其与肿瘤的发展进程密切相关，在多种恶性肿瘤中发现miR–100 表达降低[1,3,5]。mTOR 是miR–100 靶基因之一，miR–100 可通过调控mTOR等靶基因表达发挥抑癌作用[4,5]。本项目拟采用miR–100 模拟剂转染BGC–823 细胞，检测miR–100对胃癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及对蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)/mTOR 信号通路的影响，探讨胃癌细胞增殖、凋亡与 miR–100 调控Akt/mTOR 信号通路之间的关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    人胃癌细胞株BGC–823、SGC–7901、MKN–45和人正常胃黏膜上皮细胞株GES–1 均购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT–PCR)引物购于生工生物工程(上海)股份有限公司；转染试剂mimics、inhibitor、mock及mTOR–WT、mTOR–MUT 购于Invitrogen 公司；RPMI–1640、MEM、DMEM 培养基和胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购于Invitrogen 公司；Total RNA抽提试剂盒购于生工生物工程(上海)股份有限公司；逆转录试剂盒PrimerScript RT Master Mix 购于Spark Jade 公司；RIPA 裂解液购于Spark Jade 公司；CCK–8 试剂盒、Annexin V–FITC 凋亡试剂盒购于Bioss 公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司；一抗及二抗均购于CST公司 ......