朱韬 陈巧玲 陶革方 黄卫平

    1.台州市中心医院(台州学院附属医院)整形美容外科，浙江台州 318000；2.浙江省台州医院特需病房，浙江台州 317000

    瘢痕疙瘩又称结缔组织增生，是创面愈合过程中胶原合成代谢持续活跃导致成纤维细胞和胶原过度增生的结果，呈肿瘤样侵袭性生长[1]。手术切除、放疗和激素是常用的治疗方法，但治疗效果差且常伴有复发[2]。由于瘢痕疙瘩的发病病因尚不清楚，因此，迫切需要了解瘢痕疙瘩形成的潜在机制，以探讨新的治疗靶点。微小RNA(microRNA，miRNA)在细胞增殖、分化等多种生物学过程中发挥关键作用。目前，已经发现多个miRNA 参与瘢痕疙瘩的形成和生长[3]。此外，miRNA 也被认为是一种新型的细胞过程调控因子，参与成纤维细胞增生和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)沉积，这些均与伤口愈合有关[4]。例如，过表达miR-21-5p 可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts，KFs)的增生和迁移[5]。因此miRNA 在瘢痕疙瘩纤维化中发挥重要作用，可能成为基因治疗的新靶点。miR-203a-5p是一种肿瘤抑制因子，与肿瘤细胞增生、迁移和侵袭有关[6]。但关于miR-203a-5p 在瘢痕疙瘩中的作用和确切分子机制报道较少。B 细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2)/beclin-1 通路是调控细胞自噬凋亡的重要通路，且被证明与KFs的生长有关[7]。本研究拟检测miR-203a-5p 对KFs细胞增生、迁移和凋亡的影响，并探讨Bcl-2/beclin-1通路在此过程中的作用，旨在为瘢痕疙瘩的治疗提供新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器

    KFs 细胞(中国科学院上海细胞库)；DMEM培养基和胎牛血清(天津灏洋生物有限公司PM1900429)；Lipofectamine 2000 转染试剂盒、miRNA 阴性对照(miR negative control，miR-NC)(5'-UUCUCCGAACGAACGUGUCAC-3')、miR-203a-5p 抑制剂(5'-CCCUCCUCCUUGCUUGGGUUG-3')和miR-203a-5p 模拟(5'-GUGAGGACUCGGGAG GUGGC-3')(上海吉凯生物公司)；Trizol(美国Invitrogen 公司)；cDNA 反转录试剂盒和实时荧光反转录聚合酶链反应(real-time fluorescence-PCR ......