项 烁 张 弛

    ·论 著·

    小干扰RNA修饰BMSCs分泌的外泌体对CCI动物模型修复的促进作用研究

    项 烁 张 弛

    浙江大学医学院附属金华医院(金华市中心医院)康复科，浙江金华 321000

    探讨Piezo2沉默质粒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)来源外泌体修复慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury，CCI)动物模型的相关作用。以成熟的大鼠为实验对象，提取大鼠的骨髓组织培养原代BMSC，超速离心法提取Piezo2基因siRNA沉默质粒转染的BMSC来源外泌体，用手术方案构建CCI动物模型，根据实验目的将入组的SD大鼠分成模型组、BMSC组和外泌体组，利用荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光染色法检测Piezo2、NeuN、IbA1和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的mRNA相对表达量。原代BMSC的CD29、CD90和CD105蛋白呈阳性，而CD45、CD34和CD11b呈阴性。而外泌体组动物(dorsal root ganglion，DRG)组织中脊髓背角小胶质细胞的激活明显弱于模型组和BMSC组。外泌体组Piezo2的mRNA相对表达量明显低于BMSC组和模型组(1 材料与方法

    1.1 实验动物和实验细胞

    实验动物选择12只SPF级SD大鼠，周龄(5.36±1.43)周，体质量(349±55)g，购自浙江省中医药大学实验动物中心[实验动物许可证号：SCXK(浙)2021-1010]；饲养于金华市实验动物中心内[实验动物使用许可证号：SYXK(浙)2021- 0024]。实验开始前于(22±2)℃、50%～60%湿度、12h明暗交替的环境中适应性饲养1周，期间自由饮水进食。实验细胞为骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)，取自大鼠股骨侧的骨髓组织，采用原代培养法。本研究方案获得金华市中心医院伦理委员会批准[(伦理审批号：(研)2021-109-47)]。

    1.2 BMSC的提取和鉴定

    以成熟的SD大鼠为实验对象，采用腹腔注射3%水合氯醛0.4ml/kg行麻醉，然后骨髓穿刺针提取后腿大腿骨内骨髓组织，采用差速培养法培养原代细胞，加入含20%胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃，5%CO2的培养箱中，培养原代BMSC细胞 ......