孙婷，马思琪，郜艳翠，刘远航，李琳，曲银娥

    华北理工大学基础医学院 河北省慢性疾病基础医学重点实验室，河北唐山 063210

    多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)常见于育龄期女性，发病率为6%～8%[1]，其特征是生殖、内分泌和代谢异常，但持续的激素失衡会导致月经周期不规律、排卵障碍等，可导致女性不孕。颗粒细胞(granulosa cells，GCs)是卵泡的主要组成部分，是分泌性激素的重要细胞，在女性卵巢内，通过GCs 凋亡机制调控优势卵泡发育及卵泡闭锁[2]。有研究报道，PCOS 患者卵巢GCs可能存在异常细胞凋亡调控而引起PCOS[3]。研究发现PCOS 患者体内维生素D(vitamin D，VD)不足与PCOS 发病有一定关系，给予适当VD 治疗可改善PCOS 患者血压情况、降低胰岛素抵抗以及总睾酮(testosterone，T)和雄烯二酮水平，同时，VD 在调节人类和大鼠的排卵障碍中起着重要作用[4-5]。PI3K/AKT/mTOR 信号通路参与了PCOS 疾病的发生，并对PCOS 卵泡异常发育起到了调控作用[6]，但VD 是否通过PI3K/AKT/mTOR 影响颗粒细胞凋亡目前尚不明确。本研究通过构建PCOS 大鼠模型，给予VD 治疗，分离培养GCs，给予PI3K 抑制剂LY294002 处理，探讨VD 对颗粒细胞凋亡的影响及其作用机制，为治疗PCOS 提供新的方案。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 3 周龄SD 雌性大鼠21 只，体质量55～70g，购自北京华阜康生物科技有限公司[实验动物可证号：SCXK(京)2019-0009]，饲养于华北理工大学动物实验室中心：室内温度23.0℃，湿度45%。本研究经华北理工大学医学伦理委员会审批(伦理审批号：SQ2022098)。

    1.1.2 药物与试剂 来曲唑(生产单位：浙江海正药业股份有限公司，批准文号：H20133109，规格：2.5mg)，维生素D(生产单位：青岛双鲸药业股份有限公司，批准文号：H20113033，规格：每粒含维生素D 400 单位)；羧甲基纤维素钠(Adams-beta)；PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bax蛋白、Bcl-2 抗体(沈阳万类生物科技有限公司，批号分别为M09282477、4020965、HJ1121、HJ1121、50613、M08091506、M07221637、M0912208)；β-actin 抗体(武汉爱博泰克生物科技有限公司 ......