聂桂兰，范徐妃，王春茶，于辉兰，范俊霞

    lncRNA NEAT1调节miR-15a-5p/HOXD10轴对子痫前期滋养细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

    聂桂兰1，范徐妃2，王春茶1，于辉兰1，范俊霞1

    1.金华市妇幼保健院产科，浙江金华 321000；2.金华市中心医院产科，浙江金华 321000

    探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)核富集转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1，NEAT1)对子痫前期(preeclampsia，PE)滋养细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及分子机制。体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/Svneo，分为正常对照(NC)组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+anti-NC组和si-NEAT1+anti- miR-15a-5p组。采用四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞术和Transwell小室实验检测细胞增殖活性、凋亡和侵袭能力；实时定量聚合酶链反应检测细胞中NEAT1、miR-15a-5p和同源盒基因D10(homeobox D10，HOXD10)mRNA表达；蛋白质印迹法检测细胞中HOXD10和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相关蛋白[钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和神经钙黏素(N-cadherin)]的表达；双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation，RIP)实验验证HTR-8/Svneo细胞中NEAT1、miR-15a-5p和HOXD10的调控机制。敲减NEAT1可显著促进HTR-8/Svneo细胞增殖、侵袭和EMT，抑制细胞凋亡，并上调miR-15a-5p表达，抑制HOXD10的mRNA和蛋白表达(1 材料与方法

    1.1 主要材料

    人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/Svneo购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)阴性对照(si-NC)和NEAT1 siRNA(si-NEAT1)、miR-15a-5p mimic、miR-15a-5p inhibitor及其阴性对照(miR-NC、inhibitor-NC)购自广州Ribobio公司；四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium，MTT)细胞增殖/毒性检测试剂盒、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；Magna RIP? RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒购自美国Millipore公司；兔源一抗HOXD10、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)购自英国Abcam公司；钙黏蛋白E(E- cadherin)、波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N- cadherin)购自美国Cell Signaling Technology公司 ......