陈金明，杨关根，裘建明，王东，秦靓，沈忠

    结直肠癌CD146基因甲基化与患者临床病理特征和生存的关系

    陈金明，杨关根，裘建明，王东，秦靓，沈忠

    浙江省杭州市第三人民医院肛肠科，浙江杭州 310009

    探讨结直肠癌组织中CD146基因甲基化改变与患者临床病理特征和生存的关系。应用甲基化特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)检测方法，分析CD146基因甲基化。采用电化学发光法进行定量检测结直肠癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)含量。采用Kaplan-Meier生存曲线计算结直肠癌患者生存率。与结直肠癌组相比，对照组和腺瘤组CD146基因甲基化阳性率差异有统计学意义(1 资料与方法

    1.1 一般资料

    收集杭州市第三人民医院2015年1月至2016年6月外科手术切除并有完整随访资料的结直肠癌组织标本68例。纳入标准：①经组织病理学检查诊断为结直肠癌；②首次行结直肠癌根治性切除术，术前未行放化疗；③患者或家属随访依从性好。排除标准：①合并其他脏器恶性肿瘤；②术前已接受放、化疗治疗；③合并严重心脏、肺、肝脏、肾脏等基础疾病；④无法配合随访。68例结直肠癌患者中，男37例，女31例，年龄26～80岁，平均年龄为(57.39±14.58)岁。选取同期手术切除和结肠镜下摘除结直肠腺瘤的患者26例，其中男15例，女11例，年龄30～73岁，平均年龄为(54.85±11.90)岁。另收集正常结直肠黏膜标本15例作为对照组。随访方式采用邮件、电话和门诊随访，随访截止日期为2021年6月30日。总生存时间(overall survival，OS)定义为手术后第1天至患者死亡日期或截止日期。至随访截止日期，68例随访患者中，29例患者死亡。同时收集所有入组患者的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)水平。本研究经浙江省杭州市第三人民医院伦理委员会审批(伦理审批号：Y-KL2020008、Y-KL2020009)，所有入选患者及家属均签署知情同意书。

    1.2 甲基化特异性PCR检测

    CD146在启动子区的甲基化状况：采用酚氯仿抽提，乙醇沉淀法提取组织DNA，用ddH2O溶解，紫外分光光度计测定其浓度及纯度，置于–20℃冰箱保存。取2μg的DNA标本用亚硫酸氢盐处理，然后经DNA Wizard纯化回收试剂盒(美国Promega公司)纯化回收DNA，所得修饰后DNA作为甲基化特异性PCR扩增的模板(立即使用或–20℃保存) ......