结直肠癌CD146基因甲基化与患者临床病理特征和生存的关系
遗传学,表观,1一般资料,2甲基化特异性PCR检测,3甲基化特异性PCR产物分析与癌胚抗原检测,4统计学方法,1CD146基因甲基化在结直肠各组织中的阳性率比较,2结直肠癌组织中CD146基因甲基化与
陈金明,杨关根,裘建明,王东,秦靓,沈忠结直肠癌CD146基因甲基化与患者临床病理特征和生存的关系
陈金明,杨关根,裘建明,王东,秦靓,沈忠
浙江省杭州市第三人民医院肛肠科,浙江杭州 310009
探讨结直肠癌组织中CD146基因甲基化改变与患者临床病理特征和生存的关系。应用甲基化特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,分析CD146基因甲基化。采用电化学发光法进行定量检测结直肠癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)含量。采用Kaplan-Meier生存曲线计算结直肠癌患者生存率。与结直肠癌组相比,对照组和腺瘤组CD146基因甲基化阳性率差异有统计学意义(1 资料与方法
1.1 一般资料
收集杭州市第三人民医院2015年1月至2016年6月外科手术切除并有完整随访资料的结直肠癌组织标本68例。纳入标准:①经组织病理学检查诊断为结直肠癌;②首次行结直肠癌根治性切除术,术前未行放化疗;③患者或家属随访依从性好。排除标准:①合并其他脏器恶性肿瘤;②术前已接受放、化疗治疗;③合并严重心脏、肺、肝脏、肾脏等基础疾病;④无法配合随访。68例结直肠癌患者中,男37例,女31例,年龄26~80岁,平均年龄为(57.39±14.58)岁。选取同期手术切除和结肠镜下摘除结直肠腺瘤的患者26例,其中男15例,女11例,年龄30~73岁,平均年龄为(54.85±11.90)岁。另收集正常结直肠黏膜标本15例作为对照组。随访方式采用邮件、电话和门诊随访,随访截止日期为2021年6月30日。总生存时间(overall survival,OS)定义为手术后第1天至患者死亡日期或截止日期。至随访截止日期,68例随访患者中,29例患者死亡。同时收集所有入组患者的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平。本研究经浙江省杭州市第三人民医院伦理委员会审批(伦理审批号:Y-KL2020008、Y-KL2020009),所有入选患者及家属均签署知情同意书。
1.2 甲基化特异性PCR检测
CD146在启动子区的甲基化状况:采用酚氯仿抽提,乙醇沉淀法提取组织DNA,用ddH2O溶解,紫外分光光度计测定其浓度及纯度,置于–20℃冰箱保存。取2μg的DNA标本用亚硫酸氢盐处理,然后经DNA Wizard纯化回收试剂盒(美国Promega公司)纯化回收DNA,所得修饰后DNA作为甲基化特异性PCR扩增的模板(立即使用或–20℃保存) ......
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