邹鹏涛，何磊，张方，朱波

    南昌大学第二附属医院心血管内科，江西南昌 330006

    冠心病是心血管疾病中的常见病症，其病变机制为冠状动脉出现粥样病变，最终使个体出现诸如心肌缺血、缺氧或坏死等临床症状[1-2]。全球每年死于冠心病的病例总数近700万，位居单病种死因之首[3]。miRNA已被多项研究证实参与动植物基因表达调控，主要机制为通过降解靶基因mRNA或调控其蛋白表达影响机体生理机制[4]。miR-29a是miRNA的一员，被证实广泛参与多种心血管疾病的发生和发展。张建兴等[5]研究发现心肌梗死患者血清miR-29a水平显著高于不稳定型心绞痛患者，提示miR-29a与心肌缺血-再灌注关联密切。Yang等[6]研究发现结直肠癌患者中miR-29a表达显著上调，而通过抑制miR-29a的表达可发挥抑制癌细胞迁移和侵袭的作用。Silvis等[7]研究发现炎症反应促进多种炎症因子分泌，炎症因子进一步加重冠状动脉内皮细胞损伤，加快动脉粥样硬化进程。关于miR-29a对冠心病患者内皮细胞损伤的研究较多，但对其机制的探索较少，本研究旨在通过体外细胞实验分析炎症因子对miR-29a及其对应蛋白表达的影响，以期为冠心病患者的治疗提供新的理论参考。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂与材料

    原代人脐静脉内皮细胞及内皮细胞培养基(美国Sciencell公司)、荧光检测试剂盒、细胞培养箱(美国赛默飞世尔科技公司)、蛋白核酸定量仪(美国贝克曼库尔特有限公司)、凝胶成像系统(青岛奥特凯美软控技术有限公司)、蛋白垂直电泳仪(上海伯乐生命医学产品有限公司)。

    1.2 细胞培养与增殖过程

    冻存细胞用37℃水浴融化后，在4℃环境下以3000转/min离心。在含有10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的改良RPMI-1640培养基中重悬生长。增殖过程选取对数生长期的细胞稀释至1×103cell/ml。将琼脂与培养基按1∶9的比例充分混合，加入平板中，放置在室温下使琼脂固化，然后接种细胞悬浮液混合物(1.5ml)和等体积的0.5%软琼脂。将板置于37℃、5% CO2的培养箱中，培养两周后，使之生长至合适细胞密度。将肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor- α，TNF-α)及血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A ......