蒋琦雯，徐杨，姚军，叶棋，任帅帅

    1.金华文荣医院麻醉科，浙江金华 321001；2.上海市第六人民医院麻醉科，上海 200233；3.金华市人民医院麻醉科，浙江金华 321302

    乳腺癌是一种恶性肿瘤，女性患者占比高达99%，发病率在女性癌症中位居第一[1]。乳腺癌早期可采用保乳手术切除病理组织，但癌细胞增殖快、极易迁移，多发生淋巴结转移造成全身系统疾病，必须采用放、化疗结合方式提高患者的生存率，但放、化疗副作用大且易复发，极大降低患者的生活质量[2]。因此，探索抑制乳腺癌细胞增殖的靶向制剂是临床上改善患者预后的有效途径。

    咪达唑仑具有典型的苯二氮?类药理活性，具有抗焦虑、镇静、催眠、抗肌肉松弛等作用，多用于治疗失眠和术前诱导睡眠[3]。已有研究表明，咪达唑仑可抑制三阴性乳腺癌MDA-MD-231细胞的增殖、迁移、侵袭和间充质蛋白水平，具有作为治疗乳腺癌候选药物的潜力[4]。研究发现，环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein，CREB)通路可促进肿瘤的发生、侵袭和转移[5]。本研究旨在探讨咪达唑仑对乳腺癌的影响及对cAMP/PKA/CREB通路的调节作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验材料 三阴性乳腺癌MDA-MD-231细胞株，购自中国科学院上海细胞库。

    1.1.2 主要试剂与仪器 马来酸咪达唑仑注射液(批准文号：国药准字H20031037，生产单位：江苏恩华药业股份有限公司，规格：1ml∶5mg)；Sp-cAMPS购自美国MCE公司；胎牛血清购自美国ThermoFisher公司；青霉素链霉素溶液(碧云天生物科技有限公司；规格：100ml/瓶)、DMEM细胞培养基、胎牛血清、4%多聚甲醛(paraformaldehyde，PFA)、BCA蛋白浓度测定试剂盒、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered solution，PBS)、RIPA裂解液、ECL超敏化学发光液、羊抗兔二抗、羊抗鼠二抗和结晶紫溶液购自碧云天生物科技有限公司；cAMP酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测试剂盒购自北京正四柏生物科技有限公司；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4 ......