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编号:13238131
单增李斯特菌、副溶血弧菌和沙门氏菌液相芯片检测方法的建立(2)
http://www.100md.com 2018年3月1日 《食品安全导刊》 2018年第3期
     ⑧加入100μL PBS,900rpm震荡3min重悬浮微球并混匀,置于液相芯片系统进行测试,每种微球读取100个。

    1.3 实验条件优化以及标准曲线的建立

    1.3.1 最佳抗体加入量的确定

    在不加样品和标准品的情况下,分别加入对应抗体1、5、10、20和40ng,加入过量的PE标记二抗,采用液相芯片系统测试。

    1.3.2 单一标准曲线建立

    3种标准品按照一定的比例稀释成梯度液,采用液相芯片系统测试。按照ELISA所采用的抑制率计算方式(抑制率B=(A0-An)/A0,其中A0为不加样品孔MFI值;An为加标准品或者样品孔MFI值),将各孔MFI值换算成抑制率,以抑制率为纵坐标,浓度的对数值为横坐标,建立单一标准曲线。

    1.3.3 灵敏度

    用PBS缓冲液将培养的菌10倍系列稀释,取1 08~102CFU/mL用已建立的方法进行检测。每个浓度重复检测3次,验证该方法的灵敏度。

    1.3.4 特异性

    用已建立的方法检测7种常见的食源性致病菌,每个样品重复检测3次,验证该方法的特异性。

    1.3.5 重复性

    在1d、5d、7d用此方法分别检测阳性菌和阴性菌 ......
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