程莉娟，刘群良*，谭 峰，胡 梅，周赛男

    (湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

    还少丹对D-半乳糖衰老模型小鼠心肌线粒体DNA缺失的影响

    程莉娟，刘群良*，谭 峰，胡 梅，周赛男

    (湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

    目的 探讨还少丹对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老小鼠心肌线粒体DNA(mtDNA)缺失的影响。方法 将40只小鼠随机分为空白对照组、衰老模型组、还少丹低、高剂量组，用D-半乳糖建立衰老模型，分别给予蒸馏水和还少丹水煎液灌胃。连续给药6周后，采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增心肌组织mtDNA，经琼脂糖凝胶电泳检测扩增条带，用光密度扫描定量各组mtDNA的缺失率。结果 空白对照组未见mtDNA缺失型扩增条带，其余各组均出现不同程度的缺失型扩增条带；与模型组比较，低、高剂量组小鼠心肌mtDNA缺失率明显降低，差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 还少丹能减少D-半乳糖诱导的衰老小鼠心肌mtDNA的缺失程度，提示该方能降低mtDNA的氧化损伤，保护mtDNA的结构完整性，从分子水平上为还少丹抗衰老的作用机制提供了一定的实验依据。

    还少丹；衰老；心肌；线粒体DNA；小鼠；何首乌；熟地；肉苁蓉

    线粒体是除细菌、蓝绿藻及哺乳动物的成熟红细胞之外，所有真核细胞均含有的细胞器，它是细胞能量产生与转换的重要场所。线粒体拥有一套自身的遗传控制系统，同时又受到核DNA(nDNA)的调控。随着分子生物学的发展，线粒体在衰老中的作用越来越被人们所认识并引起关注。mtDNA突变不仅可导致器官老化，而且可引发多种老年性疾病[1]。本研究拟采用D-半乳糖衰老氧化损伤模型小鼠，利用PCR技术研究小鼠心肌mtDNA的缺失程度，探讨还少丹延缓衰老的机制。现将实验方法及结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 清洁级昆明种小鼠，40只，雌性，7月龄，体质量(47.4±4.3)g，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号[SCXK(湘)2009-0004]。

    1.1.2 药物 还少丹由何首乌、熟地、肉苁蓉等中药组成，购自湖南省药材公司。还少丹水煎液：取310 g中药加800 mL水，煎煮1 h，过滤离心，取滤渣及沉淀加水煎煮1 h后再过滤离心，合并2次滤液，加热浓缩至浓度为1 g/mL(生药)，置冰箱4℃冷藏保存备用。

    1.1.3 试剂 D-半乳糖为美国Amresco公司产品；蛋白酶K为美国Merck化工技术公司产品；dNTP和Taq酶为大连TaKaRa生物工程有限公司产品；引物为上海博尚生物公司产品；其它试剂均为国产分析纯 ......