张 涛，伍君锋，肖新云，邓江艳，李帅东，刘俊青，蔡 锐*

    (湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

    ·方药研究·

    三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制作用研究

    张 涛，伍君锋，肖新云，邓江艳，李帅东，刘俊青，蔡 锐*

    (湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

    目的 探讨三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制效果，为其临床应用提供依据。方法 首先制备中药含药血清用于体外最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定。然后建立烫伤大鼠感染多重耐药铜绿假单胞菌模型，分别给予西药硫酸庆大霉素和中药三黄地榆散灌胃，正常组和模型组灌胃等容量的无菌生理盐水；在给药后的第3、7、10天检测血液中炎性细胞和炎性因子的水平。结果 体外抑菌实验显示，三黄地榆散含药血清与庆大霉素对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC、MBC均为512 μg/mL。体内实验结果显示，与模型组比较均能显著下调大鼠血清WBC、IL-1β、TNF-α的水平(P1 材料

    1.1 药物

    三黄地榆散：黄连 9 g，黄柏 9 g，黄芩 9 g，地榆3 g，紫苏3 g，冰片1 g，饮片于湖南中医药大学第一附属医院药房购入。2次水煎浓缩，药物浓度为0.43 g/mL。硫酸庆大霉素颗粒(葵花药业集团得菲尔有限公司，批号15015103)，用无菌蒸馏水溶解，最终配制为0.3 g/mL的溶液。

    1.2 实验动物

    SPF级SD大鼠，雌雄各半，体质量200～240 g，购自湖南斯莱克斯景达实验动物有限公司。许可证号：SCXK(湘)2014-0002。

    1.3 实验菌株

    多重耐药铜绿假单胞菌临床痰分离1509211399号，由湖南中医药大学第一附属医院检验科鉴定提供。挑取单个菌落，接种于液体LB营养琼脂培养基中，37 ℃下 180 r/min 摇菌 5～6 h，使其在 600 nm波长下吸光度值达到 0.8～1.0。收集处于对数生长期的细菌悬液，以半径 4 cm，3 000 r/min离心20 min。弃去上清液，用生理盐水洗涤3次重新悬浮后置于4℃冰箱备用，用平板倍比稀释法确定每毫升中CFU 为 1×106。

    1.4 主要试剂与仪器

    营养琼脂粉(杭州天和微生物试剂有限公司)，硫化钠(天津市风船化学试剂有限公司)。立式压力蒸汽灭菌器 (CLDZX-30KB上海申安医疗器械厂)。电热恒温培养箱中(上海新苗医疗器械治疗有限公司)；酶标仪(北京普朗新技术有限公司)；AC8洗板机(芬兰Thermo Labsystems) ......