刘莎莎，张 赛，汤 智，李玉冰，冯 凯，刘 湘*

    (1.湘潭市中心医院，湖南 湘潭 411100；2.湘潭市中医院，湖南 湘潭 411100；3.大连市友谊医院，辽宁 大连 116100；4.大连市口腔医院，辽宁 大连 116021)

    丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究

    刘莎莎1，张 赛2，汤 智2，李玉冰3，冯 凯4，刘 湘1*

    (1.湘潭市中心医院，湖南 湘潭 411100；2.湘潭市中医院，湖南 湘潭 411100；3.大连市友谊医院，辽宁 大连 116100；4.大连市口腔医院，辽宁 大连 116021)

    目的 观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation，H/R)损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法 首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型，采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系，确定丹酚酸B的保护作用，给药方式为预给药。实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R组)、H/R+丹酚酸B组，分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化。Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响，添加Akt抑制剂LY294002加以比较。结果 与正常对照组相比较，模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P1 材料

    1.1 细胞

    大鼠心肌细胞H9c2，购于中国科学院细胞库。

    1.2 受试药物

    丹酚酸B，购于上海融禾医药科技发展有限公司，质量分数>98%。以二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)溶解，加DMEM 稀释至所需浓度。

    1.3 主要仪器及试剂

    二氧化碳细胞培养箱购自美国Thermo Scientific公司；超净工作台购自上海智成分析仪器制造有限公司；超纯水仪购自美国Merck Millipore公司；恒温磁力搅拌器购自上海司乐仪器有限公司；台式离心机购自上海安亭科学化学仪器厂；低温冰箱购自青岛海尔股份有限公司；酶标仪购自奥地利Tecan公司；电子天平购自梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；厌氧手套箱购自美国COY Laboratory公司；SDS PAGE微型凝胶电泳及转膜设备购自美国BioRad公司；高糖DMEM培养基、无糖DMEM培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司；噻唑蓝(MTT)及活性氧簇(ROS)试剂盒购自美国ENZO公司；胰酶(Trypsin)及DMSO购自美国Sigma公司；乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒购自南京建成科技有限公司；半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒购自美国Biovision公司 ......