自发性高血压大鼠左心室肥厚的代谢组学研究(2)
2 方法2.1 动物分组
8只SHR为模型组,8只照WKY为空白对照组,自由食水喂养2周,密切观察所有实验大鼠的精神、饮食、饮水、呼吸、活动力等状况。处死后立即解剖取心脏标本。
2.2 代谢物萃取
(1)取50 mg心肌样本于2 mL EP管里,加入0.4 mL甲醇-氯仿(3∶1),再加入20 μL L-2-氯苯丙氨酸,加入钢珠,研磨仪(65 Hz)匀浆研磨处理 3 min;(2)4 °C, 12 000 r/min离心15 min;(3)小心地取出350 μL上清于2 mL进样瓶(甲烷硅基化的)中;(4)质控样本:每个样本取约10 μL(根据样本量而定)于2 mL进样瓶中,混匀。
2.3 代谢物衍生化
(1)在真空浓缩器中37 °C干燥上述提取物, 大约3.5 h;(2)向干燥后的代谢物加入80 μL甲氧胺盐试剂(甲氧胺盐酸盐,溶于吡啶20 mg/mL),轻轻混匀后,放入烘箱中80 °C孵育20 min;(3)向每个样品中迅速加入100 μL BSTFA(含有1% TCMS,v/v),将混合物70 °C孵育1h;(4)冷却至室温 ......
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