锌—α2—糖蛋白在高尿酸血症模型小鼠肾脏中表达的变化(2)
1.1.4 标本采集 造模成功后,采用断颈法处死各组小鼠,腹部正中切口取肾脏组织,-80 ℃保存。1.2 方法
1.2.1 引物设计合成 在NCBI 上搜索相关基因,上海生工生物工程技术有限公司合成ZAG及GAPDH内参引物。ZAG上游引物序列:5'-GTG ACA ACT ACC AGC CGT GT-3',下游引物序列: 5'-TTG TTG GCC TTG TTC CAG TG-3',大小107 bp;内参基因上游引物序列: 5'-GGT TGT CTC CTG CGA CTT CA-3',下游引物序列: 5'-TGG TCC AGG GTT TCT TAC TCC-3',大小138 bp。
1.2.2 总RNA提取及逆转录反应 取室温平衡-80 ℃保存的100 mg小鼠肾脏组织样本置于研钵中,加入液氮充分研磨至粉末,加1 mL Buffer RZ在15~30 ℃放置5 min分离核蛋白与核酸,低温离心取上清转入一个新的无RNase的离心管中 ......
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