2.3 兔原代RPE细胞的鉴定

    Cytokeratin-8特异性抗体免疫荧光法[14]进行鉴定。将四片玻璃片盖于24孔板，每孔加1 mL培养基，取上述“2.2”对数生长期第2代细胞约5×104个/mL细胞进行爬片，置培养箱过夜。待细胞铺平贴壁后，用4%PFA于室温固定30 min。取50 μL破膜封闭液于防水膜上，盖于细胞上，室温放置1 h。取50 μL小鼠抗兔广谱细胞角蛋白一抗滴于防水膜上，盖于细胞上，放置4 ℃环境下过夜。将玻片取出用PBS冲洗。取羊抗兔二抗，滴50 μL于防水膜上，盖于细胞上，室温放置2 h，操作过程注意避光并保持细胞湿润。2 h后将玻片用PBS冲洗，吸干多余水分，封片并于荧光显微镜下进行观察。

    2.4 CCK8法检测活血散结方含药血浆对兔RPE细胞的毒性作用

    取96孔板培养板，平行接种9组：空白对照组、正常血浆组、5%含药血浆组、10%含药血浆组、20%含药血浆组、40%含药血浆组、60%含药血浆组、80%含药血浆组、100%含药血浆组 ...... 濡傛灉鎮ㄥ湪浣跨敤鎵嬫満绛夋祦瑙堟椂鏃犳硶鏌ョ湅鎴栦笅杞藉叏鏂囷紝鍙兘鏄鎼滅储寮曟搸澶辩湡鈥滆浆鐮佲€濓紝璇风偣鍑诲睆骞曟渶涓嬫柟鐨勨€滅數鑴戠増鈥濇垨鈥滃師缃戦〉鈥濊闂€�


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