补阳还五汤精简方对氧化应激损伤血管内皮细胞保护作用研究(2)
2.4 形态学观察将各组细胞置于倒置显微镜下观察各组细胞形态变化,并拍片记录。
2.5 细胞凋亡检测
将收集的各组细胞置于PBS中洗涤2次,2 000 r/min下离心5 min,收集1×105~5×105细胞;加入 500 μL的Binding Buffer悬浮细胞;加入5 μL Annexin V-FITC混匀后,加入5 μL Propidium Iodide,混匀;室温、避光、反应5~15 min;在1 h内,采用流式细胞仪进行观察和检测。
2.6 细胞 SOD 活力和MDA 含量的检测
按“2.3”中的分组进行相应处理后,收集细胞,离心收集上清液。采用专用试剂盒检测SOD活力和MDA含量,按试剂盒检测说明书严格操作。
2.7 细胞Nrf2、HO-1的蛋白表达的检测
将裂解液融化、分装,离心得到蛋白抽提物,并用BCA法定量。备胶、凝胶电泳、转膜、封闭。加入一抗4 °C孵育过夜,一抗包括兔抗大鼠Nrf2(1∶600),兔抗大鼠HO-1(1∶600) ......
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