基于TGF-β1/Smad3通路探讨脾胃培源方对慢性萎缩性胃炎大鼠干预作用(2)
2.3 组织病理学检测取大鼠胃标本置于4%甲醛溶液中固定,常规脱水、石蜡包埋、切片,行HE染色,观察大鼠胃黏膜组织病理学改变。
2.4 ELISA法檢测大鼠血清胃蛋白酶原I(pepsinogenI, PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(pepsinogenⅡ, PGⅡ)、胃泌素(gastrin-17, G-17)水平变化
冰箱取出经腹主动脉采血分离后的大鼠血清PGⅠ、PGⅡ、G-17试剂盒及大鼠血清,具体操作按试剂盒要求操作,放入酶标仪在10 min内中用双波长即检测波长450 nm和校正波长620 nm同时读板,采集实验数据,制作标准曲线,计算各样本实际浓度。
2.5 Western Blot法检测胃组织标本中TGF-β1、Smad3蛋白的表达
提取胃黏膜组织蛋白,蛋白浓度由BCA法检测,在收集的蛋白样品中加入蛋白上样缓冲液,混匀,100 ℃加热7 min使蛋白质变性。按顺序加入蛋白样品,经SDS-PAGE电泳后,电转膜至PVDF 膜,室温封闭2 h ......
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