七味白术散对轮状病毒感染乳鼠小肠iEL CD3+T细胞核内抗病毒蛋白表达的影响(2)
1.6 标本采集分别在给药后32、40、48 h 3个时间点断头处死各组乳鼠后,立即取出回盲部至幽门的全部小肠,剥离去除肠系膜和脂肪组织,用Hanks液漂洗。
1.7 CD3+T淋巴细胞的分离
按文献[15]方法将小肠经Hanks液漂洗后,切成1 cm的片段,加入15 mL含2% FCS的RPMI-1640液,置37 ℃水浴震荡30 min,取出后再用力震荡15 s,静置2 min,待肠片下沉,收集所有液体,用150目钢网过滤2次,收集滤液,将滤液装入事先制好的尼龙毛柱中流过,收集所有滤过的液体,浓缩制成2×107个/mL的单细胞悬液,将此单细胞悬液于4 ℃ 80×g离心5 min以去除杂质,再经45%和70% Percoll制成的梯度分离液离心90×g,25 ℃ 20 min,收集45%与70%界面层细胞,用含5% FCS的RPMI-1640洗3次,过免疫磁珠,分离出CD3+T淋巴细胞 ......
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