1.7 步态观察和关节肿胀度分析

    1.7.1 步态观察 参照步态分级标准表(见表1)[12]，对空白组、模型组、治疗组进行步态观察，并记录。

    1.7.2 关节肿胀度观察 分别于造模前、造模后12、24、48、72 h用皮尺测量踝关节肿胀度(关节肿胀度=造模后关节周径-造模前的关节周径)，取2次测量所得数值的平均值，比较各组大鼠造模前后踝关节肿胀变化程度[6]。

    1.8 尿液代谢组学检测

    1.8.1 样本收集 收集24 h尿液，以8 000 r/min离心10 min，用2 mL冻存管收集上层尿液，收集完成以后及时密封置于-80 ℃的液氮罐保存，送检。

    1.8.2 样本处理 (1)代谢物萃取：取100 μL尿液样本，加入20 μL尿素酶(80 mg/mL)，振荡混匀30 s，37 °C烘箱孵育1 h;加入0.35 mL甲醇，再加入20 μL L-2-氯苯丙氨酸，漩涡混匀30 s;将上述二者混匀后 ......