泽泻汤加味方对盐敏感性HBZY21细胞中 AngII-NADPH-ROS信号通路的影响(3)
2.6 活性氧检测试剂盒检测ROS的表达水平取对数增长期的细胞,按1×105个/mL密度接种于96孔板内,每组设5个复孔,加入含NaCl 137 mmol/L和AngII 10-6 mmol/L培养基内培养24 h,设模型组、缬沙坦(1 μmol/L)组、泽泻汤加味方中药高(2 mg/L)、中(1 mg/L)、低(0.5 mg/L)剂量组,分别干预处理24 h,另设分为空白(无细胞)对照组,正常肾小球细胞作为对照。去除培养液,每孔加入荧光探针DCFH-DA10 μmol/L,37 ℃孵育20 min,用无血清的无酚红培养基洗涤细胞3次,加入无酚红培养基后于荧光酶标仪下检测各孔OD值,激发波长488 nm,发射波长525 nm。以正常组OD值与空白对照组OD值之间的差值的平均值并归一后作为正常组ROS表达水平,其他各组
ROS相对表达水平=(实验组OD值-空白对照组OD值)/(正常组OD值-空白对照组OD值)。
2.7 统计学分析
采用SPSS 21.0统计软件进行分析 ......
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