NO含量(μmol/L)=■×

    标准品浓度(20 μmol/L)×稀释倍数

    1.2.6 Western Blot检测细胞蛋白表达 取对数生长期细胞，终止培养，弃培养基，用预冷的PBS冲洗，加胰酶进行消化，收集细胞混悬液，1 000 r/min离心5 min，吸弃上清液，将离心管置于冰上。加入预冷的蛋白裂解液，不断混匀，待细胞完全裂解后，4 ℃ 10 000 r/min离心5 min，吸取上清液。按照BCA蛋白定量试剂盒说明书检测蛋白含量。用上样缓冲液调节蛋白样品，加热变性后，迅速入冰冷却。配制10%的分离胶和5%的浓缩胶，80 V恒压电泳1 h，待条带跑至浓缩胶与分离胶的交界处时，电压换为120 V。120 V恒压湿法转膜75 min，室温下封闭1 h。加入一抗(β-actin 1∶15 000，Bax 1∶1 000，Bcl-2 1∶2 000，Caspase-3 1∶5 000，cleaved Caspase-3 1∶3 000)后于4 ℃冰箱中过夜，次日洗去一抗，孵育二抗(二抗1∶5 000) ......