逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症小鼠海马CRHR1、GR、BDNFmRNA表达的影响(3)
1.7 海马病理结构检测将固定好的脑组织,进行常规石蜡包埋后切片;脱蜡后采用苏木精-伊红染色(HE染色)后,脱水至透明,擦去切片周围多余的液体,迅速滴加适量中性树脂至切片上,盖上盖玻片封固,常温下风干。玻片晾干后,放置于载物台上,光镜下观察并拍摄图片,记录下海马的形态学变化(细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色)。
1.8 实时荧光定量PCR检测海马CRHR1、GR、BDNF mRNA的表达
取冻存备用的海马组织,按说明书提取各组mRNA、反转录合成cDNA,进行PCR扩增。引物由华大基因合成,引物序列和扩增产物长度见表1。以β-actin为管家基因,用2-?荭?荭Ct法对海马神经元中CRHR1、GR、BDNF mRNA表达量进行分析,即相对mRNA表达=2-?荭?荭Ct,其中?荭?荭Ct=?荭Ct其他组-?荭Ct空白组,?荭Ct=Ct靶基因-Ct管家基因。
1.9 统计学分析
使用SPSS 21.0软件对数据进行统计,实验数据使用“x±s”表示。数据符合正态分布采用单因素方差分析,两两比较方差齐时采用LSD检验法,方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 行为学测试
与正常组比较 ......
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