加味丹参饮作用内源性H2S合成途径保护心肌缺血/再灌注损伤的实验研究(3)
取大鼠心肌组织,10%多聚甲醛浸泡固定,石蜡包埋,间断连续切片,HE染色,正置显微镜下观察心肌组织病理变化并拍照。2.4 ELISA检测大鼠血清CSE、CK、LDH含量
大鼠心肌缺血/再灌注24 h后,脱颈处死大鼠,腹主动脉取血,室温静置30 min,3 000 r/min离心10 min,取上清,分装后置于-20 ℃冰箱冻存备用。参照ELISA试剂盒说明,检测血清CSE、CK、LDH含量。
2.5 Western blot检测心肌组织CSE表达
取大鼠左心室心肌组织,加入预冷RIPA裂解液研磨,提取总蛋白,测定蛋白含量。制备好的蛋白样品,经12%SDS-PAGE凝胶电泳后,电转至PVDF膜,转膜后置于含5%脱脂奶粉封闭液中封闭2 h,Anti-rabbit CSE/β-actin一抗(CSE 1∶1 000稀釋;β-Actin1∶10 000稀释)4 ℃下孵育过夜。加HRP标记的Goat-anti-rabbit IgG二抗(1∶10 000稀释)室温孵育1 h后 ......
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