2.5 观测指标

    2.5.1 大鼠离体股骨上1/3 BMD测定 肌肉筋膜(右后肢全股骨)剔除条件下随之需要选择生理盐水将样本的筋膜洗净，用纱布和锡纸将筋膜裹好，双能X线骨密度仪(XR-26型)进行大鼠样本的骨密度测试，采用The Small Subject Scout Scan软件进行数据研究。

    2.5.2 Western Blot法检测大鼠肾组织中TRPV5介导的钙转运通路相关蛋白的表达 通过清洗、蛋白裂解、离心制备好肾样品;随后绘制蛋白标准曲线，算出蛋白浓度。灌胶、上样，根据蛋白定量的结果，计算出所有样品取样量，电泳、转膜。按TRPV5(83KD)、CaBP-D28k(28KD)、NCX1(120KD)、PMCAIb(130-250KD)、β-actin(42KD)所在位置进行切胶;室温条件下于TBST溶液(含5%脱脂奶粉)内封闭膜(载蛋白质条带)60 min。进行一抗孵育、二抗孵育;孵育洗涤后，采用ECL化学发光显示液曝光。

    2.5.3 免疫组化测试骨样本骨组织中TRPV5蛋白的表达 将股骨样品切片脱蜡至水;尿素、胰酶修复抗原;加入3% H2O2，室温10 min以灭活内源性酶。PBS冲洗3 min×3次;进行孵育一抗、 孵育二抗、DAB显色;苏木素复染5～10 min ......