1.6指标检测

    1.6.1CD86阳性表达的免疫组化法检测 每组随机取出结肠组织标本5个，流水冲洗，不同浓度的乙醇逐级脱水，置人纯乙醇和二甲苯的等体积混合液中透明，石蜡包埋切片，一抗(CD86抗体，稀释比例1：100)孵育，maxvision二抗孵育，DAB显色，苏木素复染3min，透明、封片。使用400倍镜选取阳性表达(以胞膜或胞浆内出现棕黄色颗粒染色为标志)不重复的5个视野拍片，最后使用图像分析系统分析CD86阳性染色的平均OD值。

    1.6.2ICAM-1蛋白表达的Western Blot法检测 每组随机取出结肠组织标本5个，按每20mg组织加入150-250uL裂解液提取蛋白，使用酶标法进行蛋白定量，制备SDS-PAGE胶(下层分离胶选用12%的胶)，每孔上样10ug蛋白，经电泳、湿转膜、5%脱脂奶粉室温封闭2h，分别加入一抗(ICAM-1抗体，稀释比例1：1000)室温孵育1h、1：10000稀释HRP标记的二抗室温孵育1h，显色后将膜置于化学发光系统中检测。

    1.6.3ICAM-1mRNA表达的RT-PCR法检测 每组随机取出结肠组织标本3个，根据Real-TimePCR的操作方法进行组织总RNA的提取、cDNA第一条链的合成(总RNA中DNA的消除：总RNA中DNase 1的消除;反转录：42℃ ......